Progesterone regulates corticosterone elevation and alterations in spatial memory and exploratory behavior induced by stress in Wistar rats / La progesterona regula la elevación de corticosterona y las alteraciones en memoria espacial y conducta exploratoria inducidas por estrés en ratas Wistar

El hipocampo es sensible a altos niveles de glucocorticoides.Durante la respuesta de estrés, esta estructura sufre cambios bioquímicos y celulares que afectan funciones tales como la memoria espacial y la conducta exploratoria, entre otras. En este estudio analizamos la influencia del neuroesteroide progesterona (PROG) sobre los cambios inducidos por estrés en corticosterona (CORT) urinaria, memoria espacial y conducta exploratoria. Se implantó PROG o vehículo (VEHI) a ratas macho adultas castradas y se les expuso a estrés crónico por hacinamiento o ruido ultrasónico durante 10 días. Se evaluaron niveles de PROG y CORT en orina usando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Los implantes de PROG inhibieron el incremento de CORT inducido por estrés, previnieron el detrimento de la memoria espacial en el laberinto acuático de Morris y eliminaron el incremento en la actividad exploratoria en la prueba del campo de agujeros. Estos resultados sugieren un efecto protector de la PROG, posiblemente mediado por los mecanismos ansiolíticos de la hormona, contra la elevación de corticoesteroides y el déficit conductual generado por las situaciones estresantes.

The hippocampus is sensitive to high levels of glucocorticoids during stress responses; it suffers biochemical and cellular changes that affect spatial memory and exploratory behavior, among others. We analyzed the influence of the neurosteroid progesterone (PROG) on stress-induced changes in urinary corticosterone (CORT) levels, spatial memory and exploratory behavior. Castrated adult male rats were implanted with PROG or vehicle (VEHI), and then exposed for ten days to chronic stress created by overcrowding or ultrasonic noise. PROG and CORT levels were assessed in urine using highperformance liquid chromatography (HPLC). Implanted PROG inhibited the rise of stress-induced CORT, prevented spatial memory impairment in the Morris water maze, and eliminated increased exploratory behavior in the hole-board test. These results suggest a protective role of PROG, possibly mediated by its anxiolytic mechanisms, against corticosteroids elevation and the behavioral deficit generated by stressful situations.

Participación del óxido nítrico, proteína Fos y el tallo cerebral en la retención de glucosa encefálica durante la hipoxia / Involvement of the nitric oxide, Fos protein and brain stem in the retention of brain glucose during hypoxia

Se ha descrito que el núcleo del tracto solitario (NTS), estructura del tallo cerebral y vía de relevo de las aferencias del los quimiorreceptores del senocuerpo carotídeo (RSCC), participa en el aumento en la retención de glucosa por el cerebro (RGC) ante una hipoxia. Es probable que en esta respuesta participe el óxido nítrico (NO) y la proteína Fos. En este trabajo se analiza el papel del NO en el NTS sobre la modificación de la RGC y la expresión de la proteína inmunorreactiva Fos (Fos-ir) en ratas in vivo. La inyección de un donador del NO como es el nitroprusiato de sodio (NPS) en el NTS, 4 min antes de la estimulación de los RSCC, disminuyó la RGC, pero incrementó la expresión de Fos-ir en un mayor número de neuronas en el NTS con respecto a las ratas control, que sólo recibieron líquido cefalorraquídeo artificial (LCRa) antes de la estimulación RSCC. En contraste, un inhibidor selectivo del NO como el N?-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME) en el NTS 4 min antes de la estimulación RSCC con NaCN, aumentó la RGC, pero disminuyó el número de neuronas Fos-ir comparados con el control o con NPS. La detección inmunohistoquímica de la expresión de Fos-ir en las células del tallo cerebral indica que la estimulación RSCC activa vías dependientes de NO en el NTS, para regular la RGC. El estudio de esta población de células en el NTS, serß importante para definir su caracterización.

It has been said that the nucleus tractus solitarii (NTS), one structure of the brain stem and path of apherences of chemoreceptors of carotid sinus-body, is involved in the increased glucose retention by the brain in case of hypoxia. It is likely that nitric oxide and Fos protein also take part in this response. This paper analyzes the role of nitric oxide in the NTS on the change of glucose retention by the brain and the expression of inmunoreactive protein Fos (ir-Fos) in rats in vivo. The injection of a NO donor such as sodium nitroprusiate in the NTS four minutes before the stimulation of carotid sinus-body chemoreceptors decreased glucose retention by the brain but increased the expression of ir-Fos in a higher number of neurons in NTS with respect to control group rats which only received artificial cerebrospinal fluid before the stimulation. In contrast, the use of a selective NO inhibitor such as NO-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) in the NTS four minutes before the stimulation of the chemoreceptors with NaCN, increased the glucose retention by the brain but reduced the number of neurons with ir-Fos expression when compared with the control group or the sodium nitroprusiate injection. The immunohistochemical detection of ir-Fos expression in the brain stem cells indicated that stimulation of carotid sinus-body chemoreceptors activated NO-dependent paths in the NTS to regulate glucose retention by the brain. The study of this cell population in the NTS will be important to define its characterization.

Composición químico-nutricional y de factores antinutricionales en semillas de parota (enterolobium cyclocarpum) / Nutritional-chemical composition and antinutritional factors in seeds of Enterolobium cyclocarpum / Composição químico-nutricional e de fatores antinutricionais em sementes de guanacaste (enterolobium cyclocarpum)

Mediante el análisis químico proximal se determinaron proteínas (PC), grasas (GC), fibras (FC), cenizas, humedad y extracto libre de nitrógeno (ELN) de las semillas de Enterolobium cyclocarpum, y con espectrofotometría se determinaron sus factores antinutricionales. Por el contenido de minerales, carbohidratos y proteínas que posee esta leguminosa, tiene potencial industrial, medicinal y químico, siendo una limitante la presencia de factores antinutricionales tales como glucósidos cianogénicos e inhibidores de tripsina. Mediante hidrólisis enzimática (ß-glucosidasa) se analizó la inhibición de tripsina de un extracto acuoso (NaOH 0,1N) de la muestra y en una solución estándar de tripsina se midió la actividad proteolítica en un sustrato sintético (benzoil-arginina-p-nitroanilida). En las semillas completas se encontró PC 26,13%, GC 2,85%, FC 4,95%, cenizas 2,95% y ELN 63,1%. En las almendras desecadas los valores fueron PC 34,5%, GC 7,6%, ausencia de FC, cenizas 3,3% y ELN 54,6%. Se encontraron 4,82 unidades de inhibidores de tripsina/mg, ausencia de hemaglutininas y 0,76mg de ácido cianhídrico en 100g de semillas. Estos valores correspondientes a los factores antinutricionales descritos no constituyen un riesgo al consumir las semillas, ya que son termolábiles y se eliminan por cocción en agua.

Chemical analyses were performed to quantify the protein (CP), fat (CF), fiber (CF), ash, humidity, nitrogen free extract (NFE) and antinutritional factors in extracts from Enterolobium cyclocarpum seeds. E. cyclocarpum seeds have a great potential in pharmaceutical and chemical industries due to the high content of minerals, carbohydrates and proteins. However, the seeds also contain cyanogenic glycosides such as trypsin inhibitory factor and cyanhidric acid, resulting in antinutritional effects. Trough enzymatic hydrolysis (ß-glycosidase), trypsine inhibition on an aqueous extract of the sample (0.1 N NaOH). By using a standard trypsine solution, the proteolytic activity in a synthetic substrate (benzoyl-arginine-p-nitroanilide) was studied. Analyses of the complete seeds showed; CP 26.13%, CF 2.85%, CF 4.95%, Ash 2.95%, and NFE 63.1%. The dried almonds contained CP 34.5%, CF 7.6%, undetectable fiber, ash 3.3%, and NFE 54.6%. No hemaglutinins were detected, whereas 4.82 units/mg of trypsine inhibition and 0.76 mg/100g of HCN were found. The low concentrations of trypsine inhibitor and HCN will be reduced even more by the heat treatment previous consumption, which makes the seeds suitable for human beings or animals.

Mediante a análise química proximal se determinaram proteínas (PC), gorduras (GC), fibras (FC), cinzas, umidade e extrato livre de nitrogênio (ELN) das sementes de Enterolobium cyclocarpum, e com espectrofotometria se determinaram seus fatores antinutricionais. Pelo conteúdo de minerais, carboidratos e proteínas que possui, esta leguminosa têm potencial industrial, medicinal e químico, sendo uma limitante a presença de fatores antinutricionais tais como glicosídeos cianogênicos e inibidores de tripsina. Mediante hidrólise enzimática (ß-glucosidase) se analisou a inibição de tripsina de um extrato aquoso (NaOH 0,1N) da amostra e em uma solução padrão de tripsina se mediu a atividade proteolítica em um substrato sintético (benzoil-arginina-p-nitroanilida). Nas sementes completas se encontrou PC 26,13%, GC 2,85%, FC 4,95%, cinzas 2,95% e ELN 63,1%. Nas amêndoas dissecadas os valores foram PC 34,5%, GC 7,6%, ausência de FC, cinzas 3,3% e ELN 54.6%. Encontraram-se 4,82 unidades de inibidores de tripsina/mg, ausência de hemaglutininas e 0,76mg de ácido cianídrico em 100g de sementes. Estes valores correspondentes aos fatores antinutricionais descritos não constituem um risco ao consumir as sementes, já que são termolábeis e se eliminam por cozimento em água.

Quitosana, prótesis nerviosa biodegradable y vehículo de liberación de esteroides en la regeneración del nervio facial de conejos: análisis ultra estructural / Chitosan, a biodegradable nerve prosthesis and steroid liberation method in the repair of facial nerve in rabbits: an ultra structural analysis

En la actualidad, la utilización de nuevos métodos quirúrgicos para evitar el injerto nervioso, mediante el uso de compuestos bioactivos, se ha constituido en un campo emergente de biotecnología orientada a la reparación de lesiones nerviosas utilizando compuestos neurotróficos o células liberados desde el biomaterial en contacto con el tejido dañado. Hasta el presente no existen reportes del biomaterial quitosana en la tubulización de nervios craneales y como vehículo de liberación in situ de neuroesteroides. Mediante cromatografía de gases se analizó la liberación de neuroesteroides desde prótesis de quitosana implantadas vía subcutánea y el crecimiento nervioso fue analizado mediante microscopía electrónica de transmisión y análisis morfométrico a los 15 y 45 días después de la axotomía. Los neuroesteroides presentes en las prótesis de quitosana fueron liberados en un periodo mayor de 60 días. A los 15 días de la axotomía los segmentos proximal y distal de los crecimientos nerviosos tratados con neuroesteroides revelaron fibras nerviosas no mielinizados y células de Schwann los cuales mostraron diferencias significativas con respecto de los nervios vehículo. A los 45 días, se distinguieron fibras nerviosas mielinizadas de diferentes calibres y grados de mielinización. Los principales efectos favorables sobre regeneración nerviosa se observaron por la influencia de progesterona, evidenciadas por un incremento en el numero de fibras mielinizadas, diámetro, proporción g en comparación con el nervio control vehículo. Los resultados ponen de manifiesto la utilidad del biomaterial quitosana como prótesis y vehículo de liberación de neuroesteroides para promover la regeneración nerviosa.

Regeneración inducida por el factor de crecimiento similar a insulina (IGF-I) en el nervio ciático de rata, en un modelo de axonotmesis y antagonismo por dexametasona / Insulin-like growth factor(IGF-I) induced regeneration of the sciatic nerve in rats and its antagonism by dexamethasone

El factor de crecimiento similar a insulina tipo 1 (IGF-I) ejerce efectos benéficos en la regeneración del tejido nervioso y ha sido utilizado como terapia en diferentes padecimientos. Sus efectos potentes sobre la regeneración del tejido nervioso periférico han sido demostrados mediante diversos modelos experimentales. Algunos reportes indican que los esteroides ejercen efectos antagónicos sobre la función neuroprotectora del IGF-I, diversas clases de esteroides son con frecuencia utilizados para el manejo terapéutico de lesiones inflamatorias y traumáticas de nervios periféricos. Si tal antagonismo es demostrado; el efecto de los esteroides -útil en el proceso inflamatorio agudo, puede interferir con los procesos regenerativos inducidos fisiológicamente por IGF-I en el tejido nervioso. Métodos: En ratas adultas se utilizó un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático, de manera transitoria se formó una bolsa de axonotmesis, en su interior fue inyectado IGF-I recombinante humano y el curso temporal de la lesión fue comparado con el observado en un grupo de ratas controles lesionadas y ratas previamente tratadas con dexametasona que recibieron inyección intraneural de IGF-I al momento de lesionar el nervio. Se realizó un análisis de la función nerviosa se aplicó el índice funcional del nervio ciático de Medinacelli y estudio inmunocitoquímico para identificación de astrocitos y microglia reactivos, así como estudio histológico de remielinización en el segmento nervioso lesionado. Resultados: las ratas tratadas con IGF-I sin dexametasona mostraron una recuperación funcional más acelerada. La reactividad astrocitaria y de células de microglia en la médula espinal y remielinización del nervio lesionado fueron mayores en los tejidos de éstos animales; sin embargo, al final de siete semanas no hubo diferencias en la recuperación nerviosa de las ratas pertenecientes a los distintos grupos, lo anterior demuestra efectos temporales por una sola inyección de IGF-I, sin consecuencias finales en la evolución de la lesión. Discusión: Con el modelo de axonotmesis se demostró que una sola dosis de IGF-I produjo efectos transitorios sobre la evolución del daño, también se evidenciaron efectos antagonistas por la influencia de dexametasona, -sin consecuencias negativas. La mayor reactividad de astrocitos y microglia no tuvo ninguna relación con la recuperación funcional del nervio lesionado.

La progesterona promueve la regeneración del nervio facial a través de cámaras de silicon en hamsters / Progesterone enhaces facial nerve regeneration through silicone chambers in hamsters

Estudios in vivo en el nervio ciático de ratones demostraron que los neuroesteroides progesterona y su precursor pregnenolona promueven la mielinización en el sistema nervioso periférico. Se utilizó la rama bucal del nervio facial de 99 hámster machos y se analizó la regeneración nerviosa en defectos nerviosos de 6 y 8 mm de longitud a los 15, 30, 60 y 90 días postlesión. Los segmentos nerviosos se introdujeron en tubos de Silastic, y se colocó en su interior progesterona o solución salina. La regeneración nerviosa fue evaluada mediante estudios de microscopía de luz, microscopía electrónica de transmisión, técnicas morfométricas y electromiografía. El análisis morfométrico reveló diferencias significativas entre los nervios regenerados tratados con neuroesteroides en comparación con los nervios de los grupos tratados con solución salina y el nervio normal: el número de fibras mielinizadas y el promedio del área de mielina fue mayor que los grupos tratados con salino. La mayor proporción de éxito (0.77-0.88) se logró en defectos de 6 mm y fue menor en defectos de 8 mm (0.12-0.25). Los resultados sugieren (a) se apoya la regeneración nerviosa mediante este método por la formación de un cable nervioso, lo que elimina potencialmente la necesidad de un injerto en la reparación de defectos nerviosos, y, (b) el uso de progesterona sistémica o en el interior de los tubos pueden tener influencia benéfica sobre la regeneración nerviosa.

Electrochemical fixation techniques: I. Electrochemical fixation of human brain

An electrochemical brain fixation procedure (EBFP) to treat brains excised from human cadavers is described thoroughly. It is as precise as any other similar method currently available. However, it takes only as much as 36 h to completion instead of the much longer lapses required by immersion in formaldehyde. Actions were taken to secure that it is not a source of artifacts of any kind, neither neurons nor glia or blood vessels. It is, therefore, amenable to be used as a valuable research and teaching tool. Other advantages are that it does not pose any health hazard, is money- and time-saving, and cuts down on equipment and facilities

Electrochemical fixation techniques: II. Electrochemical dog body fixation. Histological study

This is the first attempt to harden all organs of a body together without excising them. This process was accomplished in bottom-belted, gastrointestinal (GI) or intravenously (IV) catheterized dog cadavers so as to influx en electrolytic solution containing formaldehyde (ESF). The IV influx of ESF was found to be the best perfusion pathway. After 48 h of immersion in ESF, 24 h current time of 17.5 A of current intensity, 24º to 56ºC, we ended up with thoroughly fixed dog cadavers that were wrapped with ethyl alcohol:glycerol gauzes and stored in plastic bags at room temperature. Optical microscopy of every sliced tissue showed normal blood vessels, neurons, glial and Purkinje cells and their nuclei of brain and cerebellum, respectively. Cardiac muscle fibers were of normal appearance. Kidney Bowman's capsule and space were found to be normal excepto for vacuolarly degenerated tubules. Small intestine showed normal epithelial cells andcrypts of Lieberkühn. In liver, sinusoids were normally arrayed but showed vacuolar cell degeneration. Herin a method to attain an electrochemical whole body fixation is described